ทุกคนรู้ดีว่ามีแล็บมากมาย แล้วจะมีกี่คนที่รู้เกี่ยวกับแล็บ PCR? และข้อกำหนดพื้นฐานสำหรับการออกแบบห้องปฏิบัติการ PCR มีอะไรบ้าง จากนั้นจะมี VOLAB Xiaobian มาพูดคุยกับทุกคน~
1 รูปแบบห้องปฏิบัติการ PCR
โดยหลักการแล้ว ห้องปฏิบัติการทดสอบการขยาย PCR แบ่งออกเป็นสี่พื้นที่ทำงานแยกกัน ได้แก่ พื้นที่จัดเก็บและพื้นที่การเตรียมรีเอเจนต์ พื้นที่เตรียมตัวอย่าง พื้นที่การเตรียมส่วนผสมและขยายปฏิกิริยาปฏิกิริยาการขยาย และพื้นที่วิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ขยายขยาย เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้าม- การเข้าไปในพื้นที่ทำงานแต่ละแห่งจะต้องปฏิบัติตามทิศทางเดียวอย่างเคร่งครัด นั่นก็คือ จากพื้นที่จัดเก็บและพื้นที่เตรียมรีเอเจนต์เท่านั้น → พื้นที่การเตรียมตัวอย่าง → พื้นที่การเตรียมส่วนผสมของปฏิกิริยาการขยายและพื้นที่ขยาย → พื้นที่วิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ส่วนขยาย การถ่ายโอนรีเอเจนต์และตัวอย่างระหว่างแต่ละโซนการทดลองควรดำเนินการผ่านหน้าต่างการถ่ายโอน
2. การออกแบบระบบระบายอากาศและควบคุมแรงดันเครื่องปรับอากาศในห้องปฏิบัติการ
ห้องปฏิบัติการ PCR ไม่มีข้อกำหนดการทำให้บริสุทธิ์ที่เข้มงวด แต่เพื่อหลีกเลี่ยงความเป็นไปได้ที่จะเกิดการปนเปื้อนข้าม-ระหว่างพื้นที่ทดลองต่างๆ ขอแนะนำให้ใช้-ระบบกระจายอากาศที่ไหลเต็ม ในเวลาเดียวกัน สัดส่วนของการส่งและการระบายออกควรได้รับการควบคุมอย่างเข้มงวดเพื่อให้แน่ใจว่าความต้องการแรงดันของแต่ละพื้นที่ทดลอง
2.1 พื้นที่เตรียมสิ่งส่งตรวจ
การดำเนินการหลักในพื้นที่นี้คือการเก็บรักษาตัวอย่าง การสกัดกรดนิวคลีอิก (RNA, DNA) การเก็บรักษา และการเติมลงในหลอดปฏิกิริยาการขยาย และการพิจารณาการสังเคราะห์ DNA ข้อกำหนดการไล่ระดับความดันในพื้นที่นี้คือ: แรงดันบวกสัมพันธ์กับพื้นที่ที่อยู่ติดกัน เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนของละอองลอยจากบริเวณที่อยู่ติดกันเข้ามาในพื้นที่นี้ นอกจากนี้ เนื่องจากความเป็นไปได้ที่ละอองลอย-จะเกิดการปนเปื้อนระหว่างการโหลด จึงควรหลีกเลี่ยงการเดินในพื้นที่โดยไม่จำเป็น
2.2. พื้นที่จัดเก็บและเตรียมรีเอเจนต์
การดำเนินงานหลักในพื้นที่ทดลองนี้คือการเตรียมรีเอเจนต์สำหรับการจัดเก็บ การจ่ายรีเอเจนต์ และการเตรียมส่วนผสมของปฏิกิริยาหลัก รีเอเจนต์และวัสดุที่ใช้ในการเตรียมตัวอย่างควรจัดส่งโดยตรงไปยังพื้นที่นี้และจะต้องไม่ผ่านพื้นที่อื่น วัตถุดิบรีเอเจนต์จะต้องถูกจัดเก็บไว้ในบริเวณนี้และเตรียมในพื้นที่ให้เป็นรีเอเจนต์ในการจัดเก็บที่จำเป็น ไม่มีข้อกำหนดที่เข้มงวดในการควบคุมความดันอากาศ
2.3 พื้นที่การวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ขยาย
การดำเนินการหลักในพื้นที่นี้คือการกำหนดแฟรกเมนต์ที่ขยาย บริเวณนี้เป็นแหล่งที่มาหลักของการปนเปื้อนของผลิตภัณฑ์ที่ขยายขนาด ดังนั้น ข้อกำหนดการไล่ระดับความดันสำหรับพื้นที่นี้คือ: แรงดันลบสัมพันธ์กับพื้นที่ที่อยู่ติดกัน เพื่อหลีกเลี่ยงการแพร่กระจายของผลิตภัณฑ์ที่ขยายจากพื้นที่ไปยังพื้นที่อื่น
2.4 การเตรียมส่วนผสมปฏิกิริยาการขยายและโซนการขยาย
การดำเนินการหลักในด้านนี้คือการขยายดีเอ็นเอ นอกจากนี้ ยังสามารถดำเนินการเพิ่มเทมเพลต DNA ที่เตรียมไว้ (จากพื้นที่เตรียมตัวอย่าง) และส่วนผสมของปฏิกิริยาหลัก (จากพื้นที่จัดเก็บและพื้นที่เตรียมรีเอเจนต์) เพื่อเตรียมส่วนผสมของปฏิกิริยา ฯลฯ ก็สามารถดำเนินการได้ในพื้นที่นี้เช่นกัน ข้อกำหนดการไล่ระดับแรงดันในพื้นที่นี้คือ: แรงดันลบสัมพันธ์กับพื้นที่ที่อยู่ติดกัน เพื่อหลีกเลี่ยงการรั่วไหลของละอองลอยจากพื้นที่ เพื่อหลีกเลี่ยงมลพิษที่เกิดจากละอองลอย ควรลดการเดินในพื้นที่โดยไม่จำเป็นให้เหลือน้อยที่สุด การดำเนินการส่วนบุคคล เช่น การสุ่มตัวอย่าง ควรดำเนินการในม้านั่งที่สะอาด
3.1. การแบ่งพื้นที่ทำงานอย่างเข้มงวด
(1) การตั้งค่าพื้นที่ทดลองแต่ละแห่งมีความสมเหตุสมผล
(2) พื้นที่ทดลองแต่ละแห่งควรมีเครื่องหมายที่ชัดเจน (เช่น การตีเลขที่บ้านหรือสีพื้นที่แตกต่างกัน เป็นต้น) เพื่อหลีกเลี่ยงความสับสนระหว่างรายการอุปกรณ์และรีเอเจนต์ในพื้นที่ทดลองที่แตกต่างกัน
3.2 การตั้งค่าระบบที่เหมาะสม
(1) การตั้งค่าระบบระบายอากาศของเครื่องปรับอากาศ-ที่เหมาะสม ลองใช้ระบบปรับอากาศ-ส่ง-แบบเต็ม
(2) การควบคุมแรงดันลมอย่างเข้มงวดทำให้มั่นใจได้ถึงความต้องการแรงดันที่แตกต่างกันในพื้นที่การทดลองที่แตกต่างกัน
3.3 การดำเนินงานมาตรฐาน
(1) ช่างเทคนิคของห้องปฏิบัติการตรวจสอบการขยายสัญญาณจะต้องปฏิบัติงาน-ใน-การฝึกอบรมงาน และสามารถเข้าร่วมการทดสอบการขยายยีนทางคลินิกได้หลังจากผ่านการฝึกอบรมแล้วเท่านั้น
(2) ในระหว่างการดำเนินการทดลอง ผู้ปฏิบัติงานต้องสวมถุงมือและเปลี่ยนถุงมือบ่อยๆ นอกจากนี้ การใช้ฝาปิดแบบใช้แล้วทิ้งระหว่างการทำงานยังเป็นมาตรการที่มีประสิทธิภาพในการป้องกันการปนเปื้อน
(3) งานทำความสะอาดตรงเวลาและถูกต้อง หลังจากการทดลองเสร็จสิ้นต้องทำความสะอาดบริเวณนั้นทันที นอกเหนือจากของเหลวฆ่าเชื้อทั่วไปสำหรับการฆ่าเชื้อบนพื้นผิวหรือการฉายรังสีและการฆ่าเชื้อของหลอดอัลตราไวโอเลตแล้ว อุปกรณ์ทดลองบางอย่างก็ควรผ่านการฆ่าเชื้อด้วยแรงดันสูงด้วย
3.4 การจัดการที่เข้มงวด
(1) ควบคุมบุคลากรเข้าและออกจากห้องปฏิบัติการอย่างเคร่งครัด บุคคลที่ไม่เกี่ยวข้องกับการทดลองจะต้องไม่เข้าหรือออกจากห้องปฏิบัติการตามต้องการ และหากจำเป็น พวกเขาจะต้องสร้างทางเดินและประตูอิสระเข้าและออกจากพื้นที่ทดลองทั้งหมด
(2) ลดการเดินโดยไม่จำเป็นในพื้นที่ทดลองให้เหลือน้อยที่สุด เพื่อลดโอกาสที่จะเกิดการปนเปื้อนข้าม-
(3) พื้นที่การวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์แบบขยายเป็นแหล่งที่สำคัญที่สุดของการปนเปื้อนของผลิตภัณฑ์ที่ขยาย สารละลายของเสียไม่สามารถทิ้งในห้องปฏิบัติการได้ ต้องแช่ในน้ำยาฆ่าเชื้อแล้วทิ้งในที่ที่ห่างจากห้องปฏิบัติการ ทิปที่ใช้แล้วทิ้ง วัสดุควรได้รับการฆ่าเชื้อและฆ่าเชื้อ จากนั้นจึงได้รับการบำบัดอย่างสม่ำเสมอ เช่น การเผา
(4) พื้นที่วิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ขยายอาจใช้การกลายพันธุ์ของยีนและสารพิษบางอย่าง และควรให้ความสนใจเป็นพิเศษกับการปกป้องความปลอดภัยของผู้ทดลอง
3.5. สิ่งอำนวยความสะดวกในห้องปฏิบัติการที่สมบูรณ์
สิ่งอำนวยความสะดวกในห้องปฏิบัติการที่สมบูรณ์เป็นเงื่อนไขที่จำเป็นสำหรับการรับรองงานทดลอง อุปกรณ์และเครื่องมือที่เกี่ยวข้องควรได้รับการติดตั้งตามเนื้อหาการทดลองที่แตกต่างกันของห้องปฏิบัติการแต่ละแห่ง เช่น-ม้านั่งที่สะอาดเป็นพิเศษ เครื่องหมุนเหวี่ยง และเครื่องป้อนตัวอย่าง